3分钟看懂维生素D检测试剂盒的操作步骤
维生素D检测试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人维生素D(VD)获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人维*生素D(VD)正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。
维生素D检测试剂盒的操作步骤：
1)使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2)根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3)加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4)甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5)每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6)甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7)每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8)取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9)在450nm波长处测定各孔的OD值。
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